课程代码：BB061305 学时：36 学分：2
适用专业：生物技术，生物科学 课程性质：必修
执笔人：朱常香 审定人：郑成超
一、实验课的性质与任务
本课程是一门专业实验课。该课程以植物基因工程的研究程序为主线，综合了目的基因的分离、克隆，载体的构建等方面的实验内容，在注重专业性和可操作性的前提下突出先进性和系统性，加强教学内容的选择性。通过本课程的学习和实践，使学生对基因工程的全过程有系统、明确的认识，达到熟识、理解并掌握DNA重组实验原理和操作方法，提高分析问题和解决问题的能力，开拓创新能力，为从事生物技术及其相关领域的科学研究工作打下基础。
二、实验目的与要求
本课程的目的是培养高年级本科生及研究生进行基因操作的能力。教学中，要求调动教学双方的主观能动性，组织学生参加实验准备，让学生和教师共同讨论理论和实验问题，指导学生分析总结实验结果，学会正确书写科学报告（论文）。
三、实验项目及内容提要
| 基因工程综合实验1（061305） |
| 序号 | 实验名称 | 学时 | 必开 | 选开 | 实验类型 | 内容提要 |
| 验证 | 基本操作 | 综合 | 设计 |
| 1 | 感染病毒的植物总RNA提取及检测 | 8 | √ | | | √ | | | Trizol法提取感染病毒的烟草叶片的总RNA，甲醛变性凝胶电泳检测 |
| 2 | RT-PCR克隆目的基因 | 4 | √ | | | | | | 设计引物，RT-PCR扩增目的基因 |
| 3 | 基因克隆及载体构建 | 6 | √ | | | | √ | | PCR扩增产物、载体，用限制性内切酶酶切、回收，T4 DNA连接酶连接。 |
| 4 | 大肠杆菌感受态的制备 | 6 | √ | | | | √ | | 实验试剂的准备，利用Cohen方法制备大肠杆菌DH5感受态细胞 |
| 5 | 质粒DNA向大肠杆菌中转化 | 6 | √ | | | | | | 用热击法将质粒DNA转入大肠杆菌中，筛选阳性克隆 |
| 6 | 质粒DNA的微量提取及酶切鉴定 | 6 | √ | | | | √ | | 用小量法提取质粒DNA，酶切后，电泳验证。 |
四、实验报告的格式
实验报告的撰写要求使用专用实验报告纸。实验报告的内容应包括：实验目的、实验的基本原理、实验用的仪器设备及试剂、实验操作程序、实验结果与分析、实验应注意事项及问题讨论。
五、本课程考核方式、方法及实验成绩评定方法
考核及成绩评定把学生的实际动手能力放在重要地位。根据实验报告撰写情况及平时表现给予综合评定。
六、实验应配套的主要仪器设备及台（套）数
| 仪器设备名称 | 台（套）数 |
| 电泳仪 | 2 |
| 电泳槽 | 2 |
| 旋涡混合器 | 6 |
| 全温震荡培养箱 | 1 |
| 磁力搅拌器 | 6 |
| 液氮罐 | 1 |
| pH计 | 1 |
| 冰箱 | 1 |
| 超低温冰柜 | 1 |
| 分光光度计 | 1 |
| 万分之一天平 | 1 |
| 百分之一天平 | 1 |
| 低温高速冷冻离心机 | 1 |
| 普通离心机 | 6 |
| 超静工作台 | 6 |
| 微量移液器 | 12套（1000ul\200ul\20ul） |
| PCR仪 | 1 |
| 微波炉 | 1 |
| 水浴锅 | 3 |
| 恒温水浴锅 | 1 |
| 制冰机 | 1 |
| 高压灭菌锅 | 1 |
附：教学参考书目
1、使用实验指导《基因工程综合实验》操作手册。朱常香，宋云枝等，2003。
2、参考书目
（1）《分子克隆实验指南》（第三版）。J·萨姆布鲁克，D·W·拉塞尔著，黄培堂等译。科学出版社，2002。
（2）《基因工程原理与技术》。王关林，方宏筠主编，科学出版社，1998。
