学时：36学时 学分：2学分 课程性质：必修 实验个数：8个
适用专业：动医、动科、水产、兽药、动检 课程代码：BB022342
大纲执笔人：郭恒俊 大纲审定人：袁学军、高峥
一、实验课的性质与任务
现代生物化学理论和技术已成为生命科学的前沿学科。生物化学实验是一门专业基础实验的必修课，生物化学实验原理、方法和技术是生物学各分支学科和生物工程的研究的重要基础和手段，该课程的教学目的是在学生了解和掌握生物化学的基本理论的基础上，学习生物化学基本的实验技术，本课程内容自成体系，与其它专业基础实验和专业综合实验及毕业论文环节密切配合和衔接，本课程的任务是讲授生物化学实验技术的基础理论及应用，使学生掌握常规的生物化学实验的基本技术和方法，培养学生的实际操作能力、分析解决问题的能力、开拓创新思维的能力，实验设计的思维方法，以及规范的书写实验报告论文等知识。为学生进一步学习，掌握复杂的综合性的生物化学技术，毕业论文的撰写、从事生物化学和相关学科的教学、生产与研究奠定基础。
二、实验目的与要求
通过生物化学实验的学习，使学生掌握常规的生物化学实验的基本技术和方法，培养学生的实际操作能力、分析解决问题的能力、开拓创新思维的能力，实验设计的思维方法，以及规范的书写实验报告论文等知识。要求如下
1.要求学生掌握生物化学实验的基本知识:通过课前预习，熟悉实验方案和操作流程；通过在实验课教学过程中对实验结果的观察、分析和讨论，理解并掌握实验原理、基本知识点。
2.要求学生掌握生物化学实验的一些基本技能：熟练、规范地使用天平、离心机、分光光度计、水浴锅等；掌握重要的生物化学分析方法和分离技术，如电泳、层析、离心分离等；熟练掌握常用生物大分子的定性定量分析法，常规的生物分子提取分离鉴定技术，酶动力学的基础性研究常识等。
3.要求学生课前预习并写出预习报告，对实验结果要认真观察、记录、整理，规范地写出实验报告，对实验结果要结合实验原理进行分析讨论。
三、实验项目及内容提要
| 动物生物化学实验 （BB022042） |
| 序号 | 实验名称 | 学时 | 必开 | 选开 | 实验类型 | 实验目的与要求 |
| 验证 | 基本 操作 | 综合 | 设计 |
| 1 | 生物化学实验课简介及实验准备 | 1 | 是 | | | | 是 | | 介绍课程目的任务、基本内容及要求 |
| 2 | 精氨酸激酶的提取、分离及活力测定 | 5 | 是 | | | | | 是 | 本实验以精氨酸激酶的分离、纯化为主线，是一项综合设计性实验项目。实验材料选取鲜虾肉，通过研磨、提取、高速冷冻离心等方法提取粗酶液。用凝胶过滤分离各种蛋白质组分。紫外检测和部分收集器分别收集蛋白峰，检测各组分的精氨酸激酶活性，收集目的蛋白作为下面实验即蛋白质纯度、含量和性质研究的样品。 |
| 3 | 唾液淀粉酶活性的测定及醋酸纤维薄膜电泳 | 5 | 是 | | | | 是 | | 了解酶催化的高度专一性及温度、pH、抑制剂和激活剂对淀粉酶活性的影响， 掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术，了解血清中各种蛋白质成分。 |
| 4 | 过氧化氢酶Km值测定 | 5 | 是 | | | | 是 | | 通过酶活力测定进行酶动力学实验研究，求出Km 值。 |
| 5 | 酵母RNA的提取、组分鉴定及含量测定 | 5 | 是 | | | | 是 | | 酵母中含有丰富的RNA，采用稀碱法破碎细胞壁，结合离心乙醇沉淀RNA，根据核酸中不同基团与试剂发生不同的反应来进行鉴定，并用苯酚和定磷法定量测定核酸含量。 |
| 6 | 动物DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 5 | 是 | | | | | 是 | 掌握生物大分子分离提纯的一般原理和方法以及离心机的使用方法，进一步了解DNA的性质 。学会用琼脂糖电泳分析鉴定DNA纯度和含量。 |
| 7 | 还原糖含量的测定及AA纸层析 | 5 | 是 | | | | 是 | | 3,5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖的含量和掌握纸层析的基本原理及操作方法 |
| 8 | 糖酵解中间产物的鉴定及谷丙转氨酶活性的测定 | 5 | 是 | | | | 是 | | 用酶的专一性抑制剂研究代谢的中间步骤，加强对糖酵解过程的感性认识；了解谷丙转氨酶的性质和临床意义，掌握其活力的测定方法。 |
四、实验报告的格式
实验报告是做完每个实验后的总结。通过汇报本人的实验过程与结果，分析总结实验的经验和问题，加深对有关理论和技术的理解与掌握，同时也是学习撰写研究论文的过程。格式如下：
1．目的和要求 ：
2．原理 ：简明扼要地概括出实验的原理，涉及化学反应，最好用化学反应式表示。
3．试剂和仪器 ：
4．操作方法：实验方法步骤的描述要简洁，不要照抄实验指导书或实验讲义，但要写得明白，以便他人能够重复。
5．实验结果 ：应记录实际观察到的实验现象和实际得出的数据而不是照抄实验指导书所列应观察到的实验结果。
6．讨论：讨论不应是实验结果的重述，而是以结果为基础的逻辑推论。讨论部分还可以包括关于实验方法（或操作技术）和有关实验的一些问题，如实验异常结果的分析，对于实验设计的认识、体会和建议，对实验课的改进意见等。
五、本课程考核方式、方法及实验成绩评定方法
1.实验预习成绩（10分）： 实验前预习本次实验的目的、原理、操作步骤，写好预习报告，复习与实验有关的理论，了解所用仪器的使用方法。老师课堂抽查预习情况，给出成绩。
2.实验操作成绩（30分）：认真按操作规程进行实验，仔细观察实验现象，把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上。完成实验后，实验结果（包括实物）及记录交老师检查，老师根据学生在实验课上的操作情况、实验结果和数据、值日等给出实验操作成绩。
3.实验报告成绩（30分）：扼要说明本次实验必须达到的目的和要求；用自行设计的流程图或表格来表示操作步骤；着重进行结果与讨论，包括对实验设计的分析与借鉴，对实验数据的处理和计算，结合实验原理对实验现象和结果进行分析讨论，对实验所遇到的问题探讨实验的改进意见等；对能提出独到而合理见解或建设性意见者酌情加分。
4.实验理论考试（30分）：着重于实验基本理论兼顾实验操作的关键步骤；每个实验都要考查，知识点要多；全部考试内容多为客观题；考试形式为闭卷。
5.成绩计算公式：总成绩 =预习成绩（10分）+ 实验操作成绩（30分）+实验报告成绩（30分）+ 实验理论考试成绩（30分）
六、实验应配套的主要仪器设备及台（套）数（以一个实验教学班为标准）
| 仪器名称 | 型号 | 台（）套 | 使用实验序号 |
| 蛋白纯化系统 | MC99-3 | 8 | 2 |
| 高速冷冻离心机 | 进口 | 1 | 2 |
| 紫外分光光度计 | 软件操作 | 2 | 2 |
| 台式高速离心机 | 进口 | 4 | 4 |
| 紫外分析仪 | ZF型 | 1 | 4 |
| 电泳仪（含电泳槽） | DYY-8C | 8 | 4 |
| 微波炉 | | 4 | 4 |
| 恒温金属浴 | CHB-100 | 4 | 4 |
| 紫外分光光度计 | UV2000 | 4 | 5 |
| 电子天平 | 1/100 | 30 | 涉及到每个实验 |
| 水浴锅 | | 20 | 涉及到每个实验 |
| 冰箱 | | 10 | 涉及到每个实验 |
| 电子天平 | 1/1000 | 2 | 涉及到每个实验 |
| 磁力搅拌器 | | 8 | 涉及到每个实验 |
| 可见分光光度计 | S22PC | 16 | 6、7 |
| 高速大容量离心机 | TGL-40B | 8 | 5、7 |
| 电热鼓风干燥箱 | 2002 | 2 | 涉及到每个实验 |
| 酸度计 | 进口 | 8 | 涉及到每个实验 |
| 光照培养箱 | GXZ-300C | 4 | 涉及到每个实验 |
| 液氮生物容器(液氮罐) | 10L | 2 | 4 |
| 杀菌锅 | ZDX-35BI | 1 | 涉及到每个实验 |
| 计算机 | 联想 | 15 | 涉及到每个实验 |
| 多媒体 | | 7 | 涉及到每个实验 |
| 移液器 | 进口1ml 100ul 20ul | 50套 | 涉及到每个实验 |
附：教学参考书目
1.叶宝兴、朱新产主编，生物科学基础实验，高等教育出版社，2007.7
2.王宪泽主编，生物化学实验技术原理和方法，中国农业出版社，2002.9
3.文材基主编，基础生物化学实验，陕西科学技术出版社，1995
4.西北农业大学主编，基础生物化学实验指导，陕西科学技术出版社，1987参考
5.周顺伍主编，生物化学实验技术，北京农业大学出版社，1991
6.李建武等合编，生物化学实验原理和方法，北京大学出版社，1994
