一、液体发酵系统技术指标
具有温度、转速、氧气流量、空气流量、pH 、DO 、补料、消泡显示及控制功能，并配有机械消泡浆。
1、温度：自动控制范围：自来水温+5℃～ 50℃﹙±0.2 ℃ ﹚显示范围：0 ～150 ℃
2、搅拌转速：调速范围50 ～1000±5rpm
3、空气流量：显示控制范围0 ～ 10L/min
4、pH显示控制：2 ～12pH±0.05﹙酸碱双向﹚
5、溶解氧：0 ～150±2℅
6、补料、消泡蠕动泵各一台
7、罐体总容积10L，设计压力2.0kg/c㎡、最高工作压力2.0kg/c㎡，设计工作温度131 ℃
8、灭菌方法:手动控制蒸汽消毒灭菌
9、功率：主机：3kw， 单相220v
10、气源：2 ～4kg/c㎡
11、蒸汽： 2 ～4kg/c㎡
二、管路说明
该流程图中空气管路阀门的标号为“AXX”，蒸汽管路阀门的标号为“SXX”，冷却水管路阀门标号为“WXX”，冷凝水管路阀门标号为“VXX”，电磁阀标号为“CXX”，物料管路阀门标号为“PXX”，冷冻水管路标号为“CWX”，其它气体管路标号为“NXX”。
1、空气及其净化
来自空气压缩机的压缩空气经净化器（外接减压稳定器、除水、除尘、空气予过滤器）进入发酵罐空气总管，空气流量计针阀A01、阀A02、单向阀、空气过滤器，阀A03到达反应器内，尾气经阀VT1排出，本管路具有计量，净化作用。注：空气流量显示的流量是以过滤器前的压力下的流量，不是标准状态下的流量。
2、蒸汽
2.1 蒸汽进夹套
蒸汽经阀S01进入夹套（上进），经阀V01排出冷凝水。蒸汽对培养基预热。
2.2 蒸气进反应器
蒸汽经阀S02、单向阀、空气过滤器、阀A03进入罐内，由排气口控制阀VT1排出。蒸汽对过滤器及空气管线消毒。
2.3 蒸汽进取样阀及放料阀
蒸汽经阀S03进入取样阀，出阀P02排出冷凝水。
3、自来水
3.1 自来水进夹套
当电磁阀C01打开时，自来水经自动注水阀、阀W01进入发应器夹套（下进），由夹套上口、阀W02、加热器、电磁阀C01排出；当电磁阀关闭时，夹套水经W02进入电加热器、循环泵、单向阀进入夹套（下口），通过夹水套水的循环，将加热器的热能带入夹套，通过夹套的换热加热发酵液。特别提示：温度自动前必须对夹套注水。
3.2 自来水进排气冷凝器，自来水经阀W03进入排气冷凝器，对发酵尾气进行冷却尽可能减少培养基的水分蒸发
4、冷却水（选配）（消毒后降温应优先使用 自来水）
冷冻水经电磁阀C02进入加热器内盘管，对夹套循环水进行冷却。
冷冻水经切换阀T02（关T01）进入自来水管线、经切换阀T04（关T03)返回冷冻水回路。
5、纯氧管线（选配）
纯氧管线：纯氧进入流量计、电磁阀C03、切断阀A21进入空气过滤器。
纯氧流量调节：开C03、A21后调节流量计的调节手柄。
6、空气流量检测与控制：
空气热质量流量计：与空气玻璃转子流量计并联安装且在热质量流量计前后安装切断阀。热质量流量计内通道必须保持干燥无尘，因此只有在发酵过程中才开质量流量计的前后切断阀A11、A12，发酵结束后应及时关闭A11、A12。（详细说明见热质量流量计的说明书）
7、补氨水管线
氨水经电磁阀C04、切断阀A31、补料针进入发酵罐，电磁阀由控制器控制。
三、实罐灭菌操作
1、准备
1.1. 盖紧罐盖上各种罐盖，旋紧罐盖上压紧螺栓。
1.2. 标定pH、DO电极，将电极插入罐体侧面的传感器口并及时地锁紧螺母，确保安装妥当防止高压下传感器弹出伤人。
1.3. 关紧发酵罐底阀P01，倒入培养基，调整PH值，旋紧接种口
注：氯离子对不锈钢会带来不可逆转的破坏，因此应避免用盐酸溶液调节PH，如工艺上无法避免用盐酸，应控制盐酸浓度不大于5 ℅且在添加过程中不得直接接触不锈钢。
1.4. 关排气冷凝器进水W03，移去进出口的软管排尽冷凝水夹套中水
1.5.提起过滤器使过滤器后的三通阀A03处于“S”位置。（S—消毒，F—发酵），
2、培养基预热
2.1 准备工作
预热启动蒸汽发生器及空气压缩机。
将控制器中的温度控制设定为手动。
开排气阀VT1，关闭其它所有阀门。
2.2 开排气阀VT1 ，开夹套冷凝水阀V01排夹套水，关闭其它阀门
2.3 启动反应器搅拌马达。调转速200 ～ 300Rpm
2.4 蒸汽进夹套：缓缓开夹套蒸汽阀S01蒸汽进夹套（注意：此时有轻微爆破声属正常，如声音过响则开阀的速度应减慢）。待排水总口排出蒸汽时调节冷凝水阀V01，控制蒸气排出量以有少量蒸汽排出即可。并控制夹套内压力不超过0.2Mpa。当培养基预热至98 ℃时，进入实罐灭菌操作，在培养基温度在80 ～ 90 ℃时可以适当的减慢升温速度，在本温度区域可以杀灭大部分的微生物。
2.5 蒸汽进取样阀：开出料阀P02（关紧底阀P01），开蒸汽阀S03，蒸气进入取样阀内腔，当阀P02排尽冷凝水后应调节其开度，以少量蒸汽排出即可。
3、实罐灭菌
3.1 过滤器消毒：（A或B任选一种，首次消毒或每五批用“A”种消毒，其余可用“B”种消毒）
A：外源蒸汽消过滤器：微开过滤器上排冷凝水阀V02、V12，开过滤器前蒸汽阀S02，蒸汽经过滤器进入反应器，当冷凝水阀V02、V12出口冷凝水很少时，调节冷凝水阀以有少量蒸汽排出为宜。当排气口有蒸汽排出或罐温达到100 ℃两分钟后，关闭排气阀VT1。调节蒸汽阀S02 ，维持过滤器前蒸汽压为0.12 ～0.16Mpa。当罐温达到100 ℃时，培养基中的溶氧接近零。可以标定溶氧的零点。
B：罐内蒸汽消过滤器：过滤器三通阀处于“S”位置。停搅拌，微开过滤器上排冷凝水阀V02、V12，当有罐压时，罐内蒸汽经空气管罐内三通阀进入过滤器，进V02、V12排出冷凝水。当排气口有蒸汽排出或罐温达到100 ℃两分钟后，关闭排气阀VT1。调节冷凝水阀V02、V12以有少量蒸汽排出为宜。当罐温达到100 ℃时，培养基中的溶氧接近零，可以标定溶氧为零点。如果升温速度比较慢可以开罐底阀P01，蒸汽进入发酵罐。
3.2 当达到预定温度或罐压，开排气阀VT1至有少量蒸汽排出，关紧或微开夹套蒸汽阀S01，微开罐底阀P01（开阀时观察视镜处培养基翻动的变化，以有少量的变化为亦），根据罐压 或罐温变化的趋势，及时调整蒸汽阀S02、S03。阀门调节宜微调应避免大幅度开关。当反应器罐压或罐温维持在预定的范围内开始计时。
3.3 保温开始后，排气阀蒸气排量不宜太小，否则可能导致液面以上的罐体部分尤其罐盖达不到消毒温度。
3.4 保温阶段应旋松接种口盖至有少量蒸气冒出。
3.5 移种管线消毒（适用于多级发酵）
在保温过程中开移种管线阀P03及受种阀前排水阀V04，保温结束前关V03。
4、灭菌完成及降温（先开后关，后开先关）
4.1 保温结束首先旋紧接种口盖.旋紧罐底阀P01，再关紧取样器的蒸汽阀S03。抬起过滤器使三通阀A03处于S位置，关紧蒸汽阀S02，调节过滤器冷凝水阀以有微量排气为宜。
4.2 关夹套蒸汽阀S01、冷凝水阀V01，开夹套进水阀W01和循环管线切断阀W02.在控制器中将温度控制方式设定为“自动”并对温度进行设定，发酵罐进入自动降温。按下搅拌开关，设定搅拌转速并“自动”控制。
4.3 当罐压接近0.05Mpa时关阀V02，缓缓开空气管线A01、A02，空气进入发酵罐，当过滤器冷凝水阀V02排尽冷凝水后就可以关闭。
注：当罐压稳定后可以将三通阀A03放回“F”位置。
4.4 在降温过程中，始终监视罐压，严禁压力掉零。当温度达到工艺要求时，调节搅拌转速、空气流量、罐压、标定溶氧电极斜率及校正pH电极的零点。
注意：
1、如另配冷冻水系统消毒后降温请选择自来水降温（控制箱左侧板N2开关拨向“W”
2、灭菌完毕，请勿关闭蒸气发生器，取样时需要用蒸汽
四、发酵操作
1、准备
1.1 溶氧电极标定：将三通阀放回“F”位置，调节空气流量、罐压、搅拌转速、罐温（为保证工艺参数的可比性，建议上面四参数维持一个固定值），标定溶氧电极斜率为100%
1.2 pH电极零点校正：高温消毒后pH电极的零点或多或少都会发生漂移，应预校正。取样应用外源pH电极精确测定培养基的pH值，根据精确测定值与在线的pH值的差值在标定菜单中直接修改零点，使在线值等同于精确测定值。
2、接种
2.1 摇瓶倒种：调节进气量至0.2VVM，开排气阀VT1至罐压接近零（不得大于0.02Mpa），予先旋松接种口，在接种口放好火焰圈并点燃（在火焰圈中放少量棉花可以助燃提高火焰的高度），打开接种口，倒入种子，然后旋紧接种盖，立即调高罐压。
2.2 差压接种：移种管线消毒：检查受种阀P04并关紧，开冷凝水阀V04，开种子罐出料阀P02，开移种管线蒸汽阀S03，开移种管线切断阀P03，当阀P01、V04处冷凝水排尽后调节阀P02、V04以有少量水蒸气排出为宜。消毒30分钟后，关紧阀P02、V04，关紧蒸汽阀S03并立即开受种阀P04，用发酵罐中的空气对移种管线进行保压，等移种管线冷却后就可以移种。
差压移种：调整种子罐与发酵罐的压力，维持种子罐罐压大于发酵罐罐压约0.05Mpa，开种子罐底阀P01，种液进入发酵罐。移种结束必须立即关紧受种阀P04，并调高发酵罐罐压。移种管线清洗时应避免移种管线中的水压高于发酵罐罐压，以免因受种阀泄露导致发酵液被污染。
2.3 发酵初始化：在控制器的发酵罐状态画面输入“发酵批号”再按“就绪”或“开始”并“确认”，发酵罐数据才能自动保存。设定发酵罐控制参数及适宜的控制模式。
3、补料
3.1 将经灭菌消毒的补料瓶及输液瓶放置于搁架上，用手动方式转动蠕动泵泵头，将输液管沿蠕动泵转动方向潜入蠕动泵内。并用蠕动泵壳内的夹子夹紧软管。
3.2 旋下补料口上闷头，用酒精棉球对补料口内橡胶塞外表面消毒，然后将针头插入并穿透密封盖，并用补料针上的螺母锁紧。
3.3 打开蠕动泵手动开关，使输液管中充满料液。置蠕动泵开关于自动状态。根据发酵工业要求设计控制方式及控制周期和脉冲。
3.4 酸碱液、消泡剂操作同补料操作。补料方式有多种，应根据工艺要求选择恰当的补料方式。
4、取样
4.1 取样器消毒：半开阀P02，开蒸汽阀S03，，蒸气进入取样器，消毒时间5—10分钟
4.2 关闭蒸气阀S03，全开出料阀P02，准备取样。
4.3 逆时针转动取样阀P01手柄，进行取样。回转手柄，取样结束。
4.4 开蒸汽阀S03，冲洗取样器，关阀S03。取样结束。
5、发酵前设计发酵参数（略，详见发酵罐说明书第五章）
6、放料：发酵结束时务必将空气管线三通阀A03置于“S”位置。放料是通过取样口放料，转动手柄开取样阀即可放料若需收集无菌料操作同取样操作。
7、发酵结束：发酵结束后必须在控制器上对发酵状态修改，确认发酵结束，发酵数据记录将自动整理并保存并将各控制参数控制方式改为手动。
